PCR在分子克隆和DNA分析中有多种用途,接下来我就向大伙儿介绍PCR实验方法步骤:以下内容是由微蓝经验网用户发布PCR实验方法步骤,希望对于用户有一定帮助,为朋友进行解决疑惑,如若想了解更多相关内容,可以向底部移动了解更多与本教程文章相关解决经验方法!
在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCRbuffer
5μl dNTPmix(2mM)
4μl 引物1(10pM)
2μl 引物2(10pM)
2μl Taq酶(2U/μl)
1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1μl 加ddH2O至50μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃40s→58℃30s→72℃60s,循环30-35次,最后在72℃保温7min。

结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl氯仿进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
END






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